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人活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒

简要描述:

人活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒操作简单、结果精确,臻科生物从业多年一直专心致力于免疫学技术的积累与发展,以其优质的产品质量与专业的技术服务,赢得业内广大人士的认可。我司也一直和国内外众多高等院校与科研单位保持良好的合作关系,共同努力合作共赢。

发布时间:2020-01-11

一、人活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒详细介绍

中文名称:人活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒

规格: 48T /96T

品牌:臻科生物

种属:人ELISA试剂盒

检测波长:450 nm

所需样本体积: 50ul

适用范围:仅供科研,不得用于临床诊断。

保存及有效期:2-8℃,六个月

检测样本种类:用于测定血清,血浆及相关液体等样本的含量或者表达。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

臻科生物供应的种属有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、人、猪牛羊、鸡鸭鹅、植物ELISA试剂盒等

二、实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人活化素A(ACV-A)水平。用纯化的人活化素A(ACV-A)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入活化素A(ACV-A),再与HRP 标记的活化素A(ACV-A)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的活化素A(ACV-A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人活化素A(ACV-A)浓度。

三、试剂盒组成

1

30 倍浓缩洗涤液

20ml×1 瓶

7

终止液

6ml×1 瓶

2

酶标试剂

6ml×1 瓶

8

标准品(240 pmol/L)

0。5ml×1 瓶

3

酶标包被板

12 孔×8 条

9

标准品稀释液

1.5ml×1 瓶

4

样品稀释液

6ml×1 瓶

10

说明书

1 份

5

显色剂A 液

6ml×1 瓶

11

封板膜

2 张

6

显色剂 B 液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1 个

 

 

四、操作步骤

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

4号标准品 

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

3号标准品 

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

2号标准品 

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

1号标准品 

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

2。加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4。配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

五、试剂盒计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

 

六、注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好

控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值

大于标准品孔di一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计

算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

 

七.特别提醒

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

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