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ELISA试剂盒内源性物质使用说明
  • 发布日期:2019-05-15      浏览次数:64
    •    血清是较为常用的标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,ELISA试剂盒分为内源性物质和外源性物质两种,其中内源性物质又分为:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig(s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
        (1)类风湿因子
        人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合,从而导致假阳性。
             解决该情况的办法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②标本用联有热变性(63℃,10min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效);③检测抗原时,可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中,使RF降解。
        (2)补体
        ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中,抗体分子发生变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q可以将二者连接起来,从而造成假阳性。
             解决的办法是:①用EDTA稀释标本;②用53℃,10min或56℃,30min加热血清使C1q灭活。
        (3)嗜异性抗体
        人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig(s)结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,也能造成假阳性。解决的办法是:可在标本稀释液中加入过量的动物Ig(s),但加入量不足或亚类不同时无效。
        (4)医源性诱导的抗鼠Ig(s)抗体
        人ELISA试剂盒临床开展的用鼠源性CD3等单克隆抗体治疗,用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向治疗等新技术,均有可能使这些病人体内产生抗鼠抗体;另外,被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠Ig(s)抗体。这些病人ELISA测定时均可产生假阳性。
             解决的办法是:测定抗原时,在标本中加入足量的正常鼠Ig(s),从而克服由于上述原因造成的假阳性。
        (5)嗜靶抗原的自身抗体
        抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体,ELISA试剂盒有时能与靶抗原结合形成复合物,在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现,解决的办法是:测定前需用理化方法将其解离后再测定。
        (6)标本中其它成分的影响血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过大等,均对ELISA测定结果有干扰作用。
        (7)交叉反应物质
        类di高辛、类AFP样物质等,是与靶抗原有交叉反应的物质。在用多抗测定抗原时对测定结果影响不大,但在用单克隆抗体测定抗原时,如果交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时,也会出现假阳性结果。
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