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牛白细胞介素8(IL-8)ELISA试剂盒
  • 发布日期:2019-12-31      浏览次数:39
    • 牛白细胞介素8(IL-8)ELISA试剂盒

      本试剂盒仅供研究使用。

      检测范围:                                                        

      15ng/L - 450ng/L

      使用目的:

      本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素8(IL-8)含量。

      牛白细胞介素8(IL-8)ELISA试剂盒实验原理

      本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛白细胞介素8(IL-8)水平。用纯化的牛白细胞介素8(IL-8)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素8(IL-8),再与HRP标记的白细胞介素8(IL-8)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素8(IL-8)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中牛白细胞介素8(IL-8)浓度。

      牛白细胞介素8(IL-8)ELISA试剂盒组成

      130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

      2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(800ng/L)0.5ml×1瓶

      3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶

      4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

      5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张  

      6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

      标本要求

      1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

      2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

      牛白细胞介素8(IL-8)ELISA试剂盒操作步骤

      1。标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

      400ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

      200ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

      100ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

      50ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

      25ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

       

       

      2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

      3。温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

      4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

      5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

      6。加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

      7。温育:操作同3。

      8.洗涤:操作同5。

      9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

      10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

      11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

      操作程序总结:

       

       

      计算

        以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

      牛白细胞介素8(IL-8)ELISA试剂盒注意事项

      1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

      2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

      3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

      4.请每次测定的同时做标准曲线,zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔di一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

      5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      6.底物请避光保存。

      7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

      8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

      9.本试剂不同批号组分不得混用。

      保存条件及有效期

      1.试剂盒保存:;2-8℃。

      2.有效期:6个月

       

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