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如何正确操作大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒?
  • 发布日期:2019-10-23      浏览次数:33
    • 如何正确操作大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒?

       

      正确操作大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒的前提是正确处理样本,下面是常用样本的处理方式

      1。  血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。
      2.  血浆用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。
      3.  组织匀浆:用预冷的PBS (0。01M, pH=7。4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

      4.  细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

      注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

       

      其次我们需要准备未提供的试剂和器材

      酶标仪(450nm)高精度加样器及枪头:0。5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

      ,37℃恒温箱蒸馏水或去离子水 

      然后了解试剂盒组成成份

       

      名称

      96孔配置

      48孔配置

      备注

      微孔酶标板

      8孔×12

      8孔×6

      标准品

      0.3mL*6管

      0。3mL*6管

      样本稀释液

      6mL

      3mL

      检测抗体-HRP

      10mL

      5mL

      20×洗涤缓冲液

      25mL

      15mL

      按说明书进行稀释

      底物A

      6mL

      3mL

      底物B

      6mL

      3mL

      终止液

      6mL

      3mL

      封板膜

      2张

      2张

      说明书

      1份

      1份

      自封袋

      1个

      1个

      1.  标准品浓度依次为:8、4、2、1、0。5、0。25 μmol/mL

      2。  经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

       

      了解大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒的注意事项

      1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

      2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

      3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

      4。 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

      5。 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

      6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

      7。 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

      8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

      9. 不能使用过期产品。

      10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

      11.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

      20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

       

      最重要的是操作步骤

      1,. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

      2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

      3. 样本孔待测样本50μL;空白孔不加。

      4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

      5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

      6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

      7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

       

       

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