深圳风彩

网站深圳风彩|在线留言|联系我们

产品分类
您现在的位置:深圳风彩 > 技术文章 > 组织、细胞到底该如何裂解?
组织、细胞到底该如何裂解?
  • 发布日期:2019-03-26      浏览次数:131
    • 组织、细胞到底该如何裂解?

      实验过程中难免会遇到特殊样本比如组织和细胞,那我们我们又该如何来处理呢?常见的处理方法就是用RIPA来裂解。如发现 RIPA 有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。根据使用量,取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM,混匀备用(PMSF 现用现加)。

      1、样品前处理:

      a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入

      150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。

      b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液,用手

      指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 5-10×10 5 细

      胞/管,然后再裂解。

      c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液

      (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量) 。

      用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

      2、后处理:

      将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western

      blotting 和免疫沉淀等操作。

      注意事项 :

      1、 使用本裂解液可以裂解细胞核,释放出核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,造成细胞裂解液粘

      稠,此时可以直接加入蛋白上样缓冲液煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可入加少量 SDS

      (1%),煮沸后离心测浓度。

      2、 本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒,请

      选择 BCA 法或者 Lowry 法检测蛋白浓度。

      3、 如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清

      用于后续实验。

    客户至上 用心服务
    在线客服
    周一至周六
    8:00-17:30
    幸运飞艇APP 上海天天彩选4 幸运飞艇APP下载 辽宁11选5 幸运飞艇APP下载 深圳风彩 内蒙古快3 深圳风彩 深圳风彩 深圳风彩