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小鼠ELISA试剂盒操作步骤
  • 发布日期:2019-03-18      浏览次数:76
    •   小鼠ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠甲状旁腺素(PTH)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠甲状旁腺素(PTH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

      小鼠ELISA试剂盒


       
        小鼠ELISA试剂盒样本处理及要求
       
        1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
       
        2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
       
        3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
       
        注:标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
       
        小鼠ELISA试剂盒操作步骤
       
        1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
       
        2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
       
        3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
       
        4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
       
        5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
       
        6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
       
        7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
       
        实验结果计算
       
        以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。
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