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人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA试剂盒操作步骤
  • 发布日期:2018-11-21      浏览次数:170
    •    人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA试剂盒操作步骤

      人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA试剂盒


        1、使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
        2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
        3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
        4、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
        5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
        6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
        7、每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
        8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
        9、在450nm波长处测定各孔的OD值。
        人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA试剂盒操作注意事项
        1、试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
        2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
        3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
        4、使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
        5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
        6、洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
        7、底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
        8、加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
        9、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
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